ABSTRACT
As endotelinas (ET) são peptídeos produzidos por uma grande variedade de células e exercem seus efeitos através da sua ligação aos seus receptores de superfície ETA e ETB. Foi demonstrado que os níveis de ET-1 estão aumentados no plasma e no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), uma doença autoimune crônica caracterizada por influxo celular, formação de edema e destruição articular. No entanto, apesar do aumento na produção de ET-1, o papel destes peptídeos durante a AR permanece pouco compreendido. O objetivo central deste estudo foi avaliar o papel das ET na migração celular e na formação de edema utilizando o modelo murino de artrite induzida por zymosan (AIZ). Nós observamos que a expressão de RNAm prepro-ET-1 encontra-se aumentada durante a AIZ e que o bloqueio dos receptores ETA e ETB reduziu significativamente a formação de edema, o recrutamento de neutrófilos para articulação e a produção de TNF-alfa, CXCL-1 e LTB4. Nós ainda demonstramos que o estímulo in vivo com ET-1 foi capaz de induzir a formação de edema, o recrutamento de neutrófilos e a produção de TNF-alfa, enquanto nossos dados in vitro demonstraram que a ET-1 é um potente estímulo quimiotático para neutrófilos. Em seguida, nós avaliamos os efeitos da lipoxina A4 (LXA4), um mediador lipídico pró-resolutivo e anti-inflamatório, durante a AIZ, focando nos efeitos da LXA4 sobre a expressão de ET-1 e sobre os efeitos próinflamatórios induzidos por ET-1 tanto in vivo quanto in vitro. O pré-tratamento com LXA4 reduziu a formação de edema, o influxo de neutrófilos, a expressão de RNAm para prepro-ET-1 e a produção articular de CXCL-1, LTB4 e TNF-alfa na articulação durante a AIZ. De acordo, o BML-111 (agonista do receptor LXA4) e o ácido acetil salicílico (AAS; responsável pela produção endógena de 15-epilipoxina) inibiram significativamente a formação de edema e o recrutamento de neutrófilos para a articulação estimulada com zymosan. Observamos também que o pré-tratamento in vivo com LXA4 durante a inflamação articular induzida por ET-1 inibiu o influxo celular, a formação de edema e a produção de TNF-alfa no lavado articular, enquanto o estímulo in vitro com LXA4 inibiu a ativação e a migração de neutrófilos induzida por ET-1. Resultados prévios obtidos durante a minha dissertação de mestrado demonstraram que uma fração enriquecida em tetranortriterpenóides obtida a partir da semente de Carapa guianensis Aublet apresentava um importante efeito anti-inflamatório na AIZ. No presente trabalho, nós demonstramos que a gedunina, uma das substâncias presentes na semente de C. guianensis, reduziu significativamente o influxo e a ativação celular induzidos por zymosan no líquido sinovial, que foi acompanhado pela diminuição da hipernocicepção e da produção de importantes mediadores inflamatórios envolvidos na AR, dentre eles a ET-1. Estudos in vitro demonstraram ainda que o tratamento com a gedunina foi capaz de impedir a ativação e a quimiotaxia de neutrófilos estimulados com ET-1. Tomados em conjunto, nossos dados demonstram que i) as ET exercem um papel pró-inflamatório central durante a AIZ, através da indução da produção de mediadores inflamatórios, formação de edema e migração de neutrófilos para as articulações inflamadas; ii) a LXA4 exerce importantes efeitos anti-inflamatórios durante a AIZ através da regulação da expressão e dos efeitos pró-inflamatórios in vitro e in vivo induzidos pela ET-1; iii) a gedunina exerce efeitos antiinflamatórios e anti-nociceptivos durante a AIZ e é capaz de inibir a expressão e a atividade de ET-1.
Subject(s)
Arthritis, Rheumatoid , Endothelin-1 , Lipoxins , Neutrophils , Anti-Inflammatory AgentsABSTRACT
As endotelinas (ETs) são peptídeos, sintetizados por diversos tipos celulares, que exercem seus efeitos através da ligação a dois receptores celulares específicos, ETa e ETb. Níveis aumentados de ET-1 foram encontrados no plasma e no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide, uma doença autoimune inflamatória crônica caracterizada pelo influxo celular, formação de edema e destruição da articulação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel das ETs na inflamação articular no modelo de artrite induzida por zimosan. Inicialmente, camundongos C57BL/6 receberam injeção intra-articular (i.a) de ET-1 (10 pmo1/cav) que, nas primeiras 6 h, induziu a migração de leucócitos, principalmente neutrófilos (sal 0,25 mais ou menos 0,005 x ET-1 0,93 mais ou menos 0,007 x 10 elevado a cinco células/cav), a formação de edema (sal 0,12 mais ou menos 0,04 x ET-1 0,47 mais ou menos 0,09 mm/joelho) que atingiu o pico em 6 h e retornou aos níveis basais em 24 h. A sarafotoxina S6c, agonista seletivo do receptor ETb induziu em 6 h o recrutamento celular, predominantemente neutrófilos (sal 0,13 mais ou menos 0,018 x S6c 0,661 mais ou menos 0,134 x 10 elevado a cinco células/cav) e a formação de edema (sal 0,14 mais ou menos 0,04 x S6c 0,37 mais ou menos 0,05 mm/joelho). Em seguida, camundongos C57BL/6 foram pré-tratados i.a. com antagonistas de receptor ETa e ETb (BQ123 e BQ788, 0,15-150 pmo1/cav, respectivamente) 5 min antes da indução da artrite por zimosan. O pré-tratamento com BQ123 ou BQ788 (15 pmo1/cav) reduziu, nas 6 primeiras horas, o acúmulo de neutrófilos (64 e 73 por cento respectivamente), a formação de edema (40 e 61 por cento respectivamente) e a produção de TNF-alfa (39 e 51 por cento respectivamente) induzida por zimosan. Vinte e quatro horas após, ambos pré-tratamentos reduziram o acúmulo de neutrófilos (65 e 61 por cento respectivamente), a formação de edema (43 e 52 por cento respectivamente) e a produção de CXCL1 (12 e 11 por cento respectivamente.
Mais ainda, o estímulo i.a. com zimosan reduziu significativamente a intensidade de expressão de ETb(6 e 24 h) e ETa (24 h). Tomados em conjunto, esses dados apontam para a participação das ETs, atuando através de seus dois receptores, na inflamação articular.